1. Биотехнологияны гылым жэне ондіріс саласы ретінде сипаттаны. Даму тарихын ашыныз, биотехнологиянын багыттарын жазыныз. Биотехнология
Соматотропинді өндіру процесінің технологиялық схемасын жасаңыз
жүктеу/скачать 474.56 Kb.
|
| 30. Соматотропинді өндіру процесінің технологиялық схемасын жасаңыз
1. Инокуляторда культивирлеу. E. Coli bl21(DE3) мәдениеті 37 °C және рН 7,0 температурада қоректік ортамен (казеин ұйқы безі гидролизаты, ашытқы сығындысы, K2HPO4, NaСl, MgSO4) толтырылған 1000 л ферментте өсірілді. Себілген тұқым мөлшері қоректік орта көлемінің 2 % құрады. 2. Посев ферментера. Сапаны бақылау: Температура, қысым, рН. 3. Ферментация. Культивирования процесінде стерильді ауа, аммиактың сулы ерітіндісі және глюкоза ерітіндісі ферментерге жеткізілді. Ауаның меншікті шығыны минутына 0,5 л деңгейінде сақталды. Ортадағы оттегі концентрациясының жоғарылауына культура сұйықтығының араластыру жылдамдығын арттыру арқылы қол жеткізілді. 3 сағат ультивированиядан кейін изопропил-тио-D-галактозид 52 мг/л концентрациясына дейін қосылып, процесті тағы 3 сағат жалғастырды. 4. Тұндыру. ЭДТА трис негізі қолданылды. Құрамында қосылу денелері бар жасушалар сепараторда сепарация арқылы тұндырылады. Шикі биомасса А буферлік ерітіндісінде (50 мМ трис-негіз ЭДТА, рН 7,0) 1 : 5 қатынасында (массасы : көлемі) суспендирленген және ағынды дезинтеграторда жойылған. Ол үшін суспензия дезинтегратордан 3-4 рет 600 атм қысыммен өткізілед 5. Центрифугалау. Дезинтеграциядан кейін жасушалық суспензия 16000 айн/мин кезінде сепараторда сепарацияланады. Тұнба Б буферлік ерітіндісінде (50 мМ трис - HCl, рН 8,0) суспендирленіп және сол жағдайда қайтадан центрифугаланады. Жалпы жасушалық лизаттағы рекомбинантты ақуыздың мөлшері және инклюзия денелерінің тазалығы PAAG электрофорезі арқылы талданады. 6. Қосылу денелерін бөліп алу. Жасушалардан қосылатын денелерді оқшаулау процесі молекулалар арасында коваленттік байланыстар түзу үшін мақсатты ақуыздың димерлері мен олигомерлерінің түзілуімен бірге жүреді. • Рекомбинантты ақуыздағы дисульфидтік байланыстарды тотықсыздандыру. • Гель - фильтрация. 7. Ренатурация. Рекомбинантты ақуыздарды алу процесінің негізгі кезеңі-денатуратталған ақуыз оның биологиялық белсенділігін қамтамасыз ететін жергілікті кеңістіктік құрылымға ие болатын ренатурация кезеңі. 8. Ионалмасу хромматографиясы. Рекомбинантты соматотропинді хроматографиялық тазарту сәйкесінше 0,5 және 1 литрлік радиалды және осьтік бағандарда 4 °C температурада жүргізілді.N-терминалды метиониннің бөлінуі жүзеге асады. 9. Гидрофобты хроматография. N-соңғы метионин қалдығы бөлінгеннен кейін рАӨГ ерітіндісіне NaCl 2 М қосылады. Содан кейін алынған ерітінді гельмен толтырылған аксиальді бағанға жағылады және 20 мМ трис-HCl, 2 M NaCl, рН = 8,0 бар буферлік ерітіндімен алдын ала теңестіріледі. Элюция 80 мл/мин ағын жылдамдығында 4 °C температурада NaCl кері градиентін қолдану арқылы жүргізіледі. Рекомбинантты ақуыздың кем дегенде 95% мономерлі формасы бар фракциялар біріктіріледі. 10. Гель-проникающая хроматография. Рекомбинантты соматотропинді соңғы тазарту 20 мМ Na2HPO4, 0,2% глицин және 4% маннит, рН = 6,8 бар буферлік ерітіндімен алдын ала теңдестірілген гель бағанында жүргізілді. Құрамында рекомбинантты соматотропин бар фракциялар мономер түрінде біріктірілді. Алынған ақуыз 1,3 мг/мл концентрациясына дейін сұйылтылды, мұздатылды және минус 20 °C температурада қолданғанға дейін сақталды. 11. Дәрілік форманы дайындау 12. Қаптау және таңбалау 13. Шыны флакондарға орау 14. Қорапьарға орау 15. Дайын өнім жүктеу/скачать 474.56 Kb. Достарыңызбен бөлісу:
|