Методы терапии и профилактики демодекоза собак

В настоящее время морфология и биология клещей Demodex canis изучены относительно хорошо, а для лечения этой инвазии предложен ряд акарицидов (1, 2, 14, 27, 37, 47, 49, 60, 67, 68, 70, 77, 84, 85, 105, 109, 112, 115).

Демодекоз относится к числу трудно поддающихся лечению болезней собак. Разные авторы предлагают свои методы и средства лечения: оперативный, газо-камерный, термический, облучение ультрафиолетовыми лучами, гамма-лучами и др. (56, 84, 85, 86, 109, 112, 115).

Были получены эффективные результаты при внутривенном введении трипансина в комбинации с препаратом серы (11). Ф.И. Василевич (1993) применял при лечении собак с чешуйчатой формой 1% раствор трипансина, который готовили на 0,4%-ном горячем (80 – 90 ºС) растворе поваренной соли. Вводили его внутривенно, в дозе 1 мл/кг массы тела, 4-х кратно с интервалом 7 дней. Из 10 собак выздоровели 5.

В другой серии опытов Ф.И. Василевич проводил комплексное лечение собак препаратом ивомек и газовой серой. Собаки, у которых была генерализованная форма демодекоза, ежедневно в течение 30 дней получали внутрь серу в дозе 40 мг/кг. Четырехкратно с интервалом 7 дней подкожно вводили ивомек из расчета 1,5 мл на 50 кг массы. Наружно наносили на пораженные участки серно-дегтярный линимент, одни раз в четыре дня, в течение месяца.

М.В. Шустрова (1996) опробовала препараты из группы пиретроидов – сумицидин, децис, креохин, применялся комплексный препарат с акарицидным, фунгицидным и бактерицидным действием – акаробор на основе песцового жира. Предложен способ лечения собак, включающий комплексное применение препаратов – марасасд (5% масляный раствор АСД-3), трихопол, нистатин и предусматривающий диетотерапию и физиотерапию.

В настоящее различными фирмами – производителями ветеринарных препаратов выпускается большое количество акарицидных средств. Это и принципиально новые соединения, и различные модификации уже известных препаратов. Многие специалисты указывают на сложность терапии демодекоза и необходимость применения комплексного подхода в лечении данного заболевания (12, 17, 39, 83).

Для достижения максимального эффективного лечения необходимо совмещать этиотропную и иммунокорректирующую терапию в связи с влиянием многофакторного патогенеза и индивидуальных особенностей организма больного животного, а также устранять неблагоприятные для организма факторы, такие как однообразное и скудное кормление, неудовлетворительное содержание, так как установлено, что чем лучше данные условия содержания, тем процесс распространения колоний клеща замедляется (80).

Установлена высокая эффективность комплексного лечения собак с применением специфических и симптоматических средств, антибиотиков, витамина В₁₂, антигистаминов и физиотерапевтической процедуры. Для лечения демодекоза собак применялся иммунопаразитан в дозе 0,1 мл на 5 кг массы тела, четырехкратно внутримышечно 1 раз в неделю.

Группа фенилпиразолов – это соединения, являющиеся антагогистами рецепторов, в которых медиатором нервного импульса является гамма-аминомасляная кислота (ГАМК). Они угнетают и блокируют и блокируют ГАМК хлорионные каналы мембран невных клеток членистоногих. Результатом этого процесса является сильное перевозбуждение нервной системы и гибель клещей и насекомых (88, 93).

Фенилпиразолы выявлены при изучении биологических свойств синтетических веществ в одной из химических лабораторий в Великобритании.

В ветеринарии представлены одним веществом – фипронил (5-амино-1-(2,6-дихлор-4-трифторметилфенил) - 4трифторметилсульфминил - 3 цианпиразола).

Фипронил, как активно действующее вещество, используется в инсектицидных средствах, которые используются в сельском хозяйстве и дезинфекции. Широко используется в ветеринарии (против блох, клещей), благодаря своему системному действию (88, 93, 101).

Комбинация фипронил-(S)-метопрен обеспечивала стойкий и выраженный эффект в отношении блох и клещей в течение 1 месяца, который достоверно превышал эффект комбинации имидаклоприд/перметрин и эффект монотерапии имидаклопридом.

Хорошо изучена токсичность фипронила для объектов окружающей среды (88, 93, 101).

По данным Костиной М.Н. (2003) и согласно данным литературы и материалам, проведенным в институте Дезинфектологии параметры острой токсичности фипронила следующие:

Острая пероральная токсичность:

ЛД₅₀ крысы-самцы – 92 мг/кг;

крысы-самки – 103 мг/кг;

мыши-самцы – 98 мг/кг;

мыши-самки – 91 мг/кг;

Острая кожная токсичность – ЛД₅₀

крысы > 2000 мг/кг;

кролики – самцы – 445 мг/кг;

кролики – самки – 354 мг/кг;

Острая ингаляционная токсичность – CL₅₀

ЛД₅₀ 0,682 мг/л (крысы, экспозиция 4 часа) (682 мг/м³).

Профилактика демодекоза, учитывая длительность и трудность лечения этого заболевания, является важной составной частью в оздоровлении животных. Различные аспекты этой проблемы освещались в работах многих ученых (7, 49, 51, 55, 69, 84).

Основные принципы профилактики заболевания выходят из знания особенностей популяции клеща D. сanis (подавляющая часть инвазионного начала находится в гостальной популяции).

Принципы профилактики:

1. 
   Предотвращение распространения этой инвазии в гостальной популяции у собак, имеющих владельцев;
   
2. 
   Регулирование численности безнадзорных животных;
   
3. 
   Недопущение попадания возбудителя демодекоза из естественных биоценозов в синантропные условия.
   

В последние годы основным направлением в разработке комплексной терапии при демодекозе собак, является получение новых комбинированных лекарственных препаратов с широким спектром действия.

За весь период нами было обследовано 1050 собак различных по полу, возрасту и породам с поражением кожно-волосяного покрова, проведено 8 опытов на 96 мышах, 12 крысах, 5 морских свинках, 5 кроликах, 36 собаках по изучению фармакотоксикологических свойств препарата Амит форте. Изучена эффективность препарата Амит форте на 373 собаках разных пород, пола и возраста.

Клиническое обследование собак на наличие демодекоза проводили путем осмотра и пальпации кожно-волосяного покрова животного в определенной последовательности, начиная с кожи головы, шеи, передних конечностей, спины, грудной клетки, живота и задних конечностей. При клиническом осмотре обращали внимание на взъерошенность, блеск волосяного покрова, на наличие алопеций, а при пальпации на шелушение, гиперемию, эластичность кожи, утолщение, на бугорки и корочки. Если во время обследования обнаруживали клинические признаки демодекоза, диагноз подтверждали микроскопическим методом.

При взятии материала для исследования использовали метод глубоких (до появления крови) соскобов кожи. Кожу сдавливали с боков пальцами, чтобы стимулировать эвакуацию клещей из волосяных фолликулов. Содержимое соскобов наносили на предметное стекло. Затем легкими постукиваниями острия иглы или скальпеля его разрушали, капали несколько капель теплой дистиллированной воды и исследовали. Исследования проводили под малым увеличением микроскопа при затемненном поле зрения.

Сезонную и возрастную динамику демодекоза собак определяли помесячно ретроспективным анализом статистических данных за 3 года (2007-2010) и клиническим обследованием. Обращали внимание на количество и возраст больных собак, степень проявления клинических признаков, изменение общего состояния животных, упитанность, поведение, качество шерсти.

В основу лечения демодекоза входил препарат Амит форте, разработанный ООО «Научно-внедренческий центр Агроветзащита». Амит форте содержит в качестве действующих веществ - фипронил - 0,1% и димедрол - 0,5%.

Амит форте наносили тонким слоем на предварительно очищенные от струпьев и корок пораженные места, из расчета 0,5 мл/кг массы животного, равномерно распределяя по пораженному участку от периферии к центру с захватом пограничной здоровой кожи до 1 см. Обработку проводили 2-5 раз с интервалом 5 дней до клинического выздоровления животного, которое подтверждали двумя отрицательными результатами акарологических исследований. Для предотвращения слизывания препарата животным надевали намордник, шейный воротник или смыкали челюсти петлей из тесьмы, которые снимали через 15-20 минут после нанесения препарата.

При изучении эффективности препарата Амит форте определяли общее состояние животных после нанесения препарата, изучали гематологические и биохимические показатели.

Изучение фармакологических свойств проводили согласно «Методических рекомендаций по экспериментальному (доклиническому) и клиническому изучению новых фармакологических веществ» (2005)

Наилучшим методом изучения является метод пробит-анализа Литчфилда и Уилкоксона в модификации З.Рота, вошедший в набор методов количественной оценки фармакологического и токсикологического эффекта с определением ЛД0, ЛД16, ЛД50, ЛД84 и ЛД100.

Основным показателем острой токсичности является статистически точная величина, вызывающая гибель 50% подопытных животных (ЛД50) – величина, которая является критерием, позволяющим отнести вещество к определенному классу опасности.

Изучение острой токсичности препарата проводили на 36 белых беспородных мышах массой 18-20 г. Препарат в чистом виде насильно вводили с помощью металлического зонда в желудок.

Все манипуляции выполнили в условиях исключающих инфицирование лабораторных животных. Наблюдение за экспериментальными животными после однократного введения проводили в течение 14 дней.

В процессе опытов учитывали внешний вид и поведение животных, состояние шерстного покровов и видимых слизистых оболочек, потребление корма и питье воды, подвижность, ритм и частоту дыхания, отмечали время возникновения интоксикации, ее тяжесть, обратимость, срок гибели животного, а также патологоанатомические изменения в органах и тканях.

Кумулятивные свойства препарата изучали на 40 белых мышах-самках живой массой 19-20 г. по методу Лима с соавторами (Lim et all, 1975).

Оценку кумулятивных свойств проводили на основании вычисленного коэффициента кумуляции (отношения ЛД₅₀, установленной в подостром опыте, к ЛД₅₀, установленной в остром опыте). Через каждые 4 дня эту дозу увеличивали в 1,5 раза. Коэффициент кумуляции вычисляли по соотношению летальных доз подострого и острого опытов.

Изучение проводили с учетом общего представления о том, что если в подостром опыте коэффициент кумуляции меньше 1 (Ккум < 1), это свидетельствует о наличии кумулятивных свойств, а больше 1 (Ккум > 1) – о наличии слабовыраженных кумулятивных свойств и развитии резистентности к изучаемому препарату.

При изучении местно-раздражающего и кожно-резорбтивного действия учитывали физиологическое состояние животных, состояние кожи (отек, утолщение кожной складки, расчесы, болезненность). Изучение проводили путем погружения хвостов белых мышей в нативный препарат при экспозиции 2 часа.

Оценку местно-раздражающего действия препарата в опытах на крысах проводили при аппликации его на кожу. Препарат в форме раствора по 0,5 мл/кг массы животного наносили на выстриженный участок кожи (2 х 2 см), после каждого нанесения препарата животных на 4 часа помещали в специальную клетку для избежания слизывания и потерь нанесенного препарата, а затем препарат смывали водой с мылом и в дальнейшем животных держали в обычных клетках. За опытными и контрольными животными вели наблюдение в течение 30 дней, фиксируя поведенческие реакции, внешний вид и состояние кожного покрова, отмечали время и степень токсикоза.

Изучение кожно-резорбтивного действия препарата проводили путем 7-дневных аппликаций на выстриженные участки спины крыс в количестве 0,5 мл/кг массы животного при экспозиции 4 часа, что составило по ДВ 3,5 мл/кг массы животного при 7-кратной аппликации. Для обеспечения полного всасывания препарата и предотвращения возможности его слизывания крыс помещали в клетки.

В качестве интегральных показателей оценки кожно-резорбтивного действия препарата были использованы: изменение массы тела, ректальной температуры, гематологического состава периферической крови, функционального состояния печени, весовых коэффициентов паренхиматозных органов.

В целях выявления местного действия препарата на слизистые оболочки вносили Амит форте в конъюнктивальный мешок глаза кролика по 1 капле. Оценку раздражающего действия проводили по характеру конъюнктивита (кератита), отмечая появление и выраженность гиперемии, отечность, инъекцию сосудов склеры и роговицы, ширину зрачка, состояние век.

Сенсибилизирующее действие изучали на морских свинках массой 250 - 350 г при многократном накожном нанесении препарата в концентрации, не вызывающей при разовом воздействии реакции нормальной кожи. Препарат наносили на один и тот же участок кожи до появления, выраженного контактного дерматита и по истечении инкубационного периода после последней аппликации, на свежевыстриженный участок кожи противоположной части спины наносили препарат в разрешающей дозе. Учет аллергической реакции и её оценку проводили через 24 часа по характеру реакции кожи (эритема, инфильтрация, изъязвления).

Влияние препарата на физиологическое состояние собак при однократном и многократном нанесении изучали клинически здоровых животных разных пород и возрастов. В процессе эксперимента проводили комплексные клинические исследования согласно общепринятым методикам. При нанесении препарата в пятикратной дозе обработку проводили в 2 этапа с интервалом 15 мин. Клинические наблюдения проводили за сутки до нанесения препарата, затем через 7 и 14 дней после его однократного применения. Клиническое обследование животных включало измерение температуры тела, подсчета количества сердечных сокращений и дыхательных движений, визуальную оценку общего состояния и определение гематологических и биохимических показателей.

Материалом для гематологических и биохимических исследований служила сыворотка крови и цельная кровь. Кровь брали при помощи вакуумной системы Venosafe путем пунктирования латеральной подкожной вены голени или бедра в утренние часы, до кормления. От каждого животного получали по 5 мл нативной крови и 6 мл стабилизированной гепарином в соотношении 1:10 (0,1-0,2 мл раствора на 1 мл крови). Образцы сыворотки крови исследовали в день получения, т.к. кровь пригодна для подсчета форменных элементов 5-6 часов с момента взятия. Мазки для определения лейкограммы готовили не позднее 6-8 часов с момента отбора, поскольку в пробах происходят изменения, искажающие результаты и мешающие их правильной оценке.

Количество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывали в камере Горяева, а также с помощью электронных автоматических или аппаратов отечественного производства типа СФЭК-60, которые дают более точный результат. Гемоглобин определяли гемометром Сали, лейкограммы - путем подсчета 200 лейкоцитов, окрашенных по Романовскому-Гимза. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) определяли по Т.Г. Панченкову через 1 час и выражали в миллиметрах.

Сыворотку получали общепринятым методом. Биохимические исследования крови, а именно определение АсАт, АлАт проводили по Райтману и Френселю, щелочную фосфатазу, холинэстеразу, общий белок, ГГТ определяли на автоматическом анализаторе «Пикколо Экспресс» (PICCOLO Xpress).

При изучении эффективности препарата Амит форте определяли общее состояние животных после нанесения препарата, изучали гематологические и биохимические показатели.

Весь материал был статистически обработан по методу Стьюдента (1980) с вычислением средних арифметических и средних квадратичных ошибок (M±m). Вероятность различий осуществляли при Р < 0,05.

3.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Эпизоотология демодекоза собак в современных

условиях г. Москвы
3.1.1. Половая, породная, возрастная и сезонная динамика демодекоза собак

В Москве популяция породистых собак составляет около 1 млн., данные же по количеству обитающих в столице бродячих собак отсутствуют. Многие из них, как домашние, так и беспризорные, заражены возбудителями гельминтозов, протозоозов и арахноэнтомозов и способствуют рассеиванию инвазионного начала во внешней среде (48, 76).

Изучение распространения демодекоза среди собак проводили в г. Москве по двум направлениям: обследование собак поступающих в ветеринарную клинику и анализ данных ветеринарной отчётности. В результате обследования животных в период с 2007 по 2010 год и при изучении отчётных и статистических данных, взятых в клиниках г. Москвы разных округов с 2003 по 2009 год установили, что больные демодекозом собаки встречаются во всех районах г. Москвы (таблица 1).

Таблица 1

Среди обследованных животных с кожными заболеваниями наибольшее распространение демодекоза было в Западном округе (85,2%), Южном (79,6%), Юго-Восточном (69,2%) и Юго-Западном округах (72,5%).

Всего за этот период нами было обследовано 1050 собак с поражением кожи. Из них у 390 диагностировали демодекоз, что составило 37,1 %.

Диагноз на демодекоз ставили на основании эпизоотологических данных, анализа клинических признаков болезни и результатов микроскопического исследования глубоких соскобов кожи с пораженных мест.

В результате обследования было установлено, что к демодекозу более восприимчивы самки. Среди больных собак было 65% самок (254 собаки), 35% самцов (136 собаки) (таблица 2, рисунок 1).

Таблица 2

Рисунок 1.

Это является одной из причин большого распространения этой болезни в городе, поскольку именно самки передают вертикальным путём возбудителя демодекоза щенкам с первых дней их жизни.

Из таблицы №3 и рисунка 2 видно, что чаще демодекозом были заражены короткошерстные породы собак 55% (215 собак), а на долю длинношерстных пород приходится 45% (175 собаки).

Таблица 3