Сұраншиев Ж.Ә. «Ветеринарлық вирусология» пэоәК


Алғашқы трипсинделген жасуша өсінділерін алу тәсілі



Pdf көрінісі
бет99/146
Дата10.09.2024
өлшемі4.8 Mb.
#503528
1   ...   95   96   97   98   99   100   101   102   ...   146
вирус

Алғашқы трипсинделген жасуша өсінділерін алу тәсілі 22-суретте 
көрсетілген схема бойынша жүргізіледі.
1 Тауық эмбрионын немесе жас жануарлар ағзаларының (бүйрек, өкпе, 
тері, тимус, тестикула) ұлпаларын 3-5 мм өлшемде ұсақтап турап, балластты 
заттардан (шырыш, қан, талқандалған жасушалар, т.б.) арылу үшін арнайы 
тұзды ерітінділермен (Хенкс) 2-3 рет шаяды.
2 Шайылған ұлпа кесінділерін колбаға салып, оған 35-37ºС-ге дейін 
жылытылған трипсиннің 0,15-0,25%-ды ерітіндісін 1:3 қатынасында қосып
магнитті араластырғышқа қояды.
3 Әрбір 3-5 минут сайын ұлпалардан ажыраған жасушаларды трипсинімен 
бірге центрифуга түтігіне ауыстырып, трипсиннің жасушаға әсерін тежеу үшін 
+2-4°С температурадағы тоңазытқышта ұстайды. Колбадағы кесінділерге қайта 
трипсин қосады да, қайта араластырады. Осындай процедураны 3-5 рет 
қайталайды. 

Алынған 
барлық 
трипсинделген 
жасуша 
суспензияларының 
фракцияларын біріктіріп, 1000 айн/мин. 10 минут бойы центрифугалайды. 


22-сурет. Алғашқы трипсинделген жасуша өсінділерін алу схемасы 
5 Центрифугаланғаннан кейін тұнба сұйықтығын төгіп, жасуша тұнбасын 
жылы қоректік ортамен араластырады да, үш қабатты дәкемен сүзеді.
6 Жасуша суспензиясының 1 мл-ін алып Горяев камерасында санайды. 
Сонан соң 1 мл қоректік ортада 700 мыңнан 1 млн жасушаға дейінгі мөлшерде 
араластырады. 
7 Дайын болған жасуша суспензиясына қан сарысуын қосып (10%-ға 
дейін), матрастарға құяды да, 37ºС-ге температураға реттелген термостатта 
инкубациялайды. 
Жасуша өсінділерін бақылау жұмыстары жарық микроскопия әдісімен іске 
асырылады.
Жасушаларды өсіру барысында олардың тіршілік циклі зерттеледі және 
өсіндідегі жасушалардың саны мен олардың өмір сүру уақыты арасындағы 
байланысы көрсетіледі.


Достарыңызбен бөлісу:
1   ...   95   96   97   98   99   100   101   102   ...   146




©dereksiz.org 2024
әкімшілігінің қараңыз

    Басты бет